“活血消癥散”的质量标准研究
周小波 ；黄华进；杨孝斌
（遵义市中医院，贵州遵义，563000）
摘要 目的：本研究旨在建立医院制剂“活血消癥散”的质量标准。方法：依据《医疗机构制剂注册管理办法》（试行）及《贵州省医疗机构制剂研究技术指导原则》（中药、民族药）（试行），采用高效液相色谱法对该制剂的主要成分进行定性与定量分析。结果：制定了“活血消癥散”的生产工艺及其质量标准。结论：通过对该制剂的生产工艺和质量控制标准进行全面研究，提升了“活血消癥散”的品质和临床应用的安全性，为其作为医院制剂的申报提供了坚实的基础。
关键词：活血消癥散；高效液相色谱；质量标准；研究
基金项目：遵义市科技计划项目（科技合作）、民族医药科学技术研究专项课题（遵市科合HZ字（2024）352号）主任中药师，主要从事中药质量标准研究。
Study on the Quality Standards of the "Huoxue Xiaozheng Powde "
Zhou Xiaobo Huang Huajin Yang Xiaobin
(Zunyi Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zunyi 563000, China)
Objective: This study aims to establish the quality standards for the hospital preparation "Huoxue Xiaozheng Powder". Methods: In accordance with the "Administrative Measures for the Registration of Medical Institution Preparations (Trial)" and the "Guizhou Province Technical Guidelines for the Research of Medical Institution Preparations (Traditional Chinese Medicine, Ethnic Medicine) (Trial)", high-performance liquid chromatography (HPLC) was employed to conduct qualitative and quantitative analyses of the main components of this preparation. Results: The production process and quality standards for "Huoxue Xiaozheng Powder" were formulated. Conclusion: Through comprehensive research on the production process and quality control standards of this preparation, the quality and clinical application safety of "Huoxue Xiaozheng Powder" have been enhanced, providing a solid foundation for its application as a hospital preparation.
Keywords: Huoxue Xiaozheng Powder; high-performance liquid chromatography (HPLC); quality standards; research
中药院内制剂的历史源远流长，历代中医根据患者病情的需要，临床应诊时，常常运用丸、散、汤、膏等剂型。目前，由于科研环境不足、制剂产品定价能力弱、审批标准高，数量减少、利润空间小等因素，导致院内中药制剂的生产条件普遍落后，缺乏现代化的生产设备和工艺流程，导致生产效率低下，产品质量不稳定。近年来，国家发布了一系列政策文件促进中医药传承创新发展，也为院内中药制剂向新药转化提供有力的政策支持[1-7]。
本文将通过高效液相色谱及薄层鉴别提升院内制剂“活血消癥散”的质量标准。“活血消癥散”原处方方中肉桂散寒止痛，温经通脉；熟地黄滋阴补肾，填精益髓；山茱萸、盐杜仲、续断补肝肾；山药补益脾阴、固肾；盐泽泻利湿泻浊;茯苓利湿健脾；牡丹皮清泄虛热；党参补中益气，生津养血；白术健脾益气，燥湿利水；黄芪补气升阳：肉苁蓉补肾助阳，润肠通便；蜂房攻毒杀虫，祛风止痛；甘草调和诸药。全方共奏益气健脾补肾温经散寒止痛之功效。
临床实践证明该处方在临床使用中没有明显的不良反应及毒副作用,是安全、有效、使用方便的中药制剂，但缺乏一个全面、完善的工艺和质量标准。但是原方未进行系统的工艺和质量控制标准研究，没有明确的生产工艺参数和产品质量控制指标，难以保障医院协定处方的质量和临床疗效。因此，本项目将按照《医疗机构制剂注册管理办法》（试行）及《贵州省医疗机构制剂研究技术指导原则》（中药、民族药）（试行）等要求[8-12]，选择处方中1-2味药做含量测定，从而对该制剂的生产工艺、质量控制标准进行系统的研究，保障制剂生产的质量可控，临床疗效的稳定、可靠。
1.含量测定方法建立与验证
本研究依据《中国药典》2025年版[13]，对“活血消癥散”中芍药苷的HPLC测定条件进行系统优化与验证。
1.1 色谱参数
经优化，确定色谱条件为：采用C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液（14:86）为流动相，检测波长230 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min。在此条件下，芍药苷峰理论塔板数高于2000，分离度良好，峰形对称[14-15]。
（1）流动相：经过实验摸索及查阅相关文献资料，采用①乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）为流动相和②甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（40∶65）为流动相。结果显示：流动相①能使待测成分芍药苷与其他杂质可得到较好的分离且峰形较好。
（2）检测波长：参照《中国药典》2025年版白芍药材中芍药苷含量测定项，选择芍药苷的检测波长为230nm。
（3）理论塔板数：根据不同品牌色谱柱测定结果及参照《中国药典》2025年版白芍中芍药苷的含量测定项，理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000。
（4）对照品的制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml含60ug的溶液，即得(对照品浓度:0.0600372mg/ml)。
1.2 供试品溶液制备工艺优化
以芍药苷提取率为指标，对制备工艺进行筛选。取装量差异项下的本品，研细，取细粉约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声30分钟 ，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
（1）提取方法的选择
取本品（批号：20250407）约1.5g,两份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入80%甲醇50ml，称定重量；一份超声处理（250W，频率35kHz）30分钟；一份加热回流30分钟；放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取方法对比：比较超声与加热回流法。结果显示两者提取率接近，但超声法更便捷，故选择超声提取。结果见下表1：
表1 提取方法的选择
提取方法 | 超声 | 回流 |
含量（mg/g) | 2.3698 | 2.4539 |
结果表明：回流与超声提取含量相差不大，超声提取方法较简单，选取超声提取。
（2）提取溶剂的选择 取本品（批号：20250407）约1.5g,三份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入甲醇50ml、80%甲醇50ml、50%甲醇50ml乙醇50ml、稀乙醇50ml，称定重量；加热回流30分钟；放冷，再称定重量，分别用相应的试剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取溶剂筛选：考察不同溶剂（甲醇、80%甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇）的提取效率。数据（表2）表明，50%甲醇提取率最高，确定为最佳溶剂：
表2提取溶剂的选择
提取溶剂 | 甲醇 | 80%甲醇 | 50%甲醇 | 乙醇 | 稀乙醇 |
含量（mg/g) | 1.8442 | 2.1750 | 2.2661 | 1.3253 | 2.1379 |
结果表明，50%甲醇溶液提取的含量最高，80%甲醇、稀乙醇、甲醇提取的含量其次，乙醇提取的含量最低，故选择80%甲醇溶液作为提取溶剂。
（3）提取时间的选择 取本品（批号：20250407）约1.5g,三份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入50%甲醇50ml，称定重量；分别超声提取15分钟、30分钟、45分钟；放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取时间考察：比较超声15、30、45分钟的提取效果。结果（表3）显示，提取30分钟时含量已达峰值，故选定30分钟为最佳提取时间：
表3提取时间的选择
回流时间（分钟） | 15 | 30 | 45 |
含量（mg/g) | 2.1609 | , 2.2328 | 2.2217 |
结果表明，超声提取30分钟含量达到最高，45分钟开始提取含量降低，从节约成本时间和提取效率上考虑，故超声提取时间选用30分钟。
最终确定的制备方法为：取细粉约1.5g，精密称定，加50%甲醇50mL，超声处理（功率500 W，频率80 kHz）30分钟，冷却后补重，滤过，取续滤液。
1.3 方法学验证
（1）专属性 取活血消癥散（批号：20250407）样品及阴性对照按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪，供试品色谱中芍药苷峰保留时间与对照品一致，阴性对照无干扰，表明方法专属性良好。
（2）线性关系考察
按上述色谱条件，精密吸取芍药苷对照品溶液（0.610182mg/ml）0.2ml，0.5ml，1ml，3ml，6ml至10ml容量瓶中，稀释至刻度，既得5个梯度溶液，加上0.610182mg/ml共6个梯度溶液，芍药苷进样量在0.1220～6.1018 μg范围内与峰面积线性关系优异，回归方程为Y=13957517.0733X-19793.1939（R=1.0000）见图1和图2。经验证，截距无统计学意义，可采用一点法计算，说明可用一点法测定芍药苷含量。芍药苷在0.1220～6.1018的范围内，对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。见表4
表4 芍药苷线性关系考察
进样量（μg） | 峰面积值 |
0.1220364 | 155505 |
0.305091 | 406134 |
0.610182 | 810498 |
1.830546 | 2538534 |
3.661092 | 5120030 |
6.10182 | 8479955 |
图1芍药苷线性图
图2芍药苷拟合过原点线性图
（2）精密度试验 精密吸取对照品溶液10µl,重复进样6次，照上述色谱条件测定，精仪器精密度RSD为0.2%（n=6），结果表明精密度良好，符合要求，结果见下表5。
表5芍药苷精密度实验结果（n=6）
试验次数 | 峰面积 | RSD（%） |
1 | 813211 | 0.2 |
2 | 813967 | |
3 | 813494 | |
4 | 813000 | |
5 | 812286 | |
6 | 810975 |
（4）稳定性试验 取活血消癥散（批号：20250407）样品，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液。在室温下每隔一段时间进样10µl，照上述色谱条件测定，测定峰面积。结果表明供试品溶液在室温下24小时内稳定（RSD=1.1%），结果见下表6。
表6 芍药苷稳定性试验结果
进样时间（h） | 峰面积 | RSD% |
0 | 872608 |
1.0 |
2 | 859309 | |
4 | 860621 | |
6 | 856288 | |
8 | 854201 | |
10 | 851086 | |
12 | 855616 | |
24 | 870799 |
（5）重复性试验 取活血消癥散（批号：20250407）样品，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份，6份供试品溶液含量测定的RSD为1.2%，平均含量为2.2050 mg/g，表明方法重复性良好，结果见下表7。
表7芍药苷重复性试验结果
试验次数 | 样品取样量（g） | 芍药苷(mg/g) | 平均值(mg/g) | RSD（%） |
1 | 1.5015 | 2.2050 | 2.2050 | 1.2 |
2 | 1.5043 | 2.2050 | ||
3 | 1.5041 | 2.2050 | ||
4 | 1.5039 | 2.2050 | ||
5 | 1.5028 | 2.2050 | ||
6 | 1.5026 | 2.2050 |
（6）加样回收试验 取已测定含量的活血消癥散（批号：20250407），平均含量0.606mg/g）样品2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入芍药苷对照品（0.2038452mg/ml）8ml，蒸干，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定芍药苷的含量，平均回收率为94.9%（RSD=1.3%，n=6），结果准确可靠，结果见下表8。
表8芍药苷回收率试验数据（n=6）
| 样品取样量（g） | 样品中芍药苷含量（mg） | 加入对照品量（mg) | 测得量 （mg） | 回收率（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） |
1 | 0.7532 | 1.65704 | 1.6474914 | 3.254334207 | 96.95 | 94.9 | 1.3 |
2 | 0.7505 | 1.6511 | 1.6474914 | 3.223501066 | 95.44 | ||
3 | 0.7512 | 1.65264 | 1.6474914 | 3.212974961 | 94.71 | ||
4 | 0.751 | 1.6522 | 1.6474914 | 3.204257502 | 94.21 | ||
5 | 0.7501 | 1.65022 | 1.6474914 | 3.195712296 | 93.81 | ||
6 | 0.7511 | 1.65242 | 1.6474914 | 3.206545461 | 94.33 |
采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，分别测定了活血消癥散（批号：20250407）中芍药苷的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。含量结果RSD为2.0%，表明方法对色谱柱品牌不敏感，耐用性良好，含量测定结果见下表9。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
（7）耐用性
表9不同品牌色谱柱试验结果
色谱柱编号 | 色谱柱品牌 | 含量（mg/g） | RSD% |
1 | Diamonsil C18 5μm，4.6×250mm | 2.124 | 2.0 |
2 | 月旭C18 5μm，4.6×250mm | 2.144 | |
3 | Agilent C18 5μm，4.6×250mm | 2.205 |
|
1.4 样品含量测定
应用上述已验证的方法，对3批共6个中试样品进行测定。按公式计算每袋制剂中芍药苷含量：含量（mg/袋）= (A样×C对×50×平均装量) / (A对×M样) ×103
式中各符号含义同常规表述。测定结果（表10）显示，各批次样品含量稳定，批次内及批次间RSD均小于1.6%，表明生产工艺稳定，产品质量均一可控。
表10 6批样品中芍药苷的含测结果
样品批号 | 含量（mg/袋） | 平均值（mg/袋） | RSD(%) |
20250407-1 | 2.20 | 2.20 | 0% |
20250407-2 | 2.20 | ||
20250408-1 | 2.19 | 2.20 | 1.6% |
20250408-2 | 2.21 | ||
20250409-1 | 2.19 | 2.19 | 0% |
20250409-2 | 2.19 |
样品测定结果分析：三批样品测定含量相差很小，工艺稳定。
3.研究结果的可行性分析
2. 讨论与结论
本研究聚焦于提升医院制剂“活血消癥散”的质量控制水平。选择处方中君药白芍的主要活性成分芍药苷作为定量指标，通过系统研究，建立了专属性强、准确、稳定的HPLC含量测定方法。全面的方法学验证证实，本方法在专属性、线性、精密度、稳定性、重复性、准确度及耐用性等方面均满足相关技术要求。同时，优化的供试品溶液制备工艺（50%甲醇超声提取30分钟）高效且操作简便。
对中试产品的测定结果表明，所建标准能有效控制本品内在质量，且工艺重现性好。本研究为“活血消癥散”的科学质量控制提供了可靠依据，亦为同类中药制剂的标准研究提供了参考。该制剂处方组成合理，原料符合规定，其质量研究与标准提升工作路径清晰[16-18]。
总结：本研究参照《中国药典》2025年版，建立了测定“活血消癥散”中芍药苷含量的HPLC方法。专属性试验显示阴性无干扰；线性考察表明在0.1220～6.1018 μg范围内线性关系良好（R>0.999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD分别为0.2%、1.1%、1.2%；加样回收率平均为94.9%（RSD=1.3%）；耐用性试验RSD为2.0%。三批样品测定结果稳定。所建方法准确、可靠，可用于该制剂的质量控制。
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